La documentación de geles es un proceso que se lleva a cabo es un equipo que permite observar, tomar fotos y analizar bandas de los geles posteriores a la electroforesis de proteínas. Este equipo permite visualizar las bandas en los geles que no son observables a simple vista debido a que estos dispositivos cuentan con una alta resolución y con lentes de enfoque que mejoran la obtención de resultados.
Esta documentación de geles, tiene como gran ventaja en que reduce los tiempos de operación de los usuarios y por lo tanto, se obtienen resultados con calidad superior a los obtenidos por lo métodos convencionales. Debido al desarrollo tecnológico en la actualidad se puede disponer de sistemas de documentación en geles, diseñados específicamente para adaptarse a las necesidades de cada laboratorio, brindando así soluciones innovadoras tanto en la captura como para el análisis de las imágenes de proteínas.
¿Qué es la purificación de proteínas?
La purificación de proteínas consiste en una serie de pasos, que tienen como objetivo aislar un solo tipo de proteína de una mezcla compleja. Esta técnica es esencial para la caracterización de la función, estructura, e interacciones.
Por lo general el material de inicio es un tejido biológico o un cultivo microbiano. Esta purificación se lleva a cabo en una serie de etapas que se pueden resumir:
- Extraer a la proteína de la matriz que la confina.
- Separar las partes proteicas y no proteicas de la mezcla.
- Separar a la proteína deseada de las demás proteínas.
Pasos para la purificación de una proteína
- Crear un extracto de proteína cruda: Los extractos crudos de proteínas intracelulares son preparados lisando las células, mediante procesos químicos o mecánicos. Las proteínas extracelulares son obtenidas centrifugando la solución y retirando las células.
- Purificación intermedia: Esta puede realizarse precipitando las proteínas con una sal altamente concentrada como por ejemplo el sulfato de amonio. Luego las sales de proteínas son pasadas a través de una membrana semipermeables en un paso conocido como diálisis o sometidas a cromatografía o filtración de la exclusión de gel.
- Purificación final: Esto se logra a través de una cromatografía de afinidad, electroforesis de gel de poliacrilamida o inmunoblotting.
Es importante destacar que electroforesis en gel es una de las principales herramientas en los laboratorios de biología molecular, celular y bioquímica. De hecho, sigue siendo uno de los principales respaldos y ensayos solicitados a la hora de publicar importantes resultados en cualquier revista científica. Por esta razón es que los investigadores requieren para procesar los geles de sistemas de alta resolución y de reconocimiento múltiple de imágenes. Bajo este punto de vista, el procesamiento de los geles exige de la mayor sensibilidad para asegurar la calidad de los resultados.
¿Para qué sirve la electroforesis de proteínas?
La electroforesis en gel de poliacrilamida permite descubrir la pureza de una muestra de proteína. Las muestras que necesitan ser analizadas entonces se cargan en pozos minúsculos en el gel con la ayuda de una pipeta. Una vez que la carga esta lista, una corriente eléctrica de 50-150 V es aplicada. Ahora, las moléculas cargadas presentes en la muestra comienzan a emigrar a través del gel hacia los electrodos, en base a su carga neta, esto permite separar a las proteínas basadas en su velocidad de migración, que a su vez depende directamente de su carga e inversamente del coeficiente de rozamiento que a su vez depende del tamaño, forma de la proteína y de la viscosidad del medio. Las bandas se examinan o se fotografían inmediatamente para la referencia futura.
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